Cygnus F500 Vero Cell ELISA Kit Vero細(xì)胞宿主蛋白免疫檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品英文名稱：Vero Cell HCP ELISA kit
產(chǎn)品中文名稱：Vero 細(xì)胞宿主蛋白免疫檢測(cè)試劑盒

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Vero Cell HCP ELISA kit產(chǎn)品介紹：
病毒疫苗或其它治療用蛋白在Vero細(xì)胞中表達(dá)是商業(yè)用大量生產(chǎn)藥物原料產(chǎn)品的經(jīng)濟(jì)簡便方法。Vero Cell HCP ELISA試劑盒開發(fā)使用了不同終端產(chǎn)品和中試樣品，４種不同疫苗產(chǎn)品是從疫苗生產(chǎn)商獲得，包括全病毒疫苗和重組蛋白。Vero Cell HCP ELISA使用具有廣泛反應(yīng)性，強(qiáng)吸附性的多克隆抗體，可以鑒定出所有Vero細(xì)胞系中高度保守的HCP。產(chǎn)品靈敏性強(qiáng)（zui低檢測(cè)濃度達(dá)0.7ng/mL）和具有高度特異性，可以應(yīng)用于任何在Vero細(xì)胞中表達(dá)的蛋白產(chǎn)物。

§檢測(cè)原理：Vero Cell檢測(cè)是一個(gè)雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫檢測(cè)。樣本中包含的Vero Cell HCPs蛋白與標(biāo)記有抗- Vero Cell抗體的辣根過氧化物酶同時(shí)反應(yīng)，反應(yīng)發(fā)生在之前涂有一層吸附性抗- Vero Cell蛋白抗體的微量滴定板中進(jìn)行。免疫反構(gòu)成為夾層式結(jié)構(gòu)：固相抗休-HCP-酶標(biāo)記抗體。反應(yīng)結(jié)束后清洗微量滴定板去除未結(jié)合反應(yīng)物。添加TMB作用底物反應(yīng)。微量滴定板讀數(shù)器上測(cè)定水解物濃度，水解物濃度與Vero Cell HCPs蛋白濃度成比例。用提供的標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)讀數(shù)可以計(jì)算出Vero Cell HCPs蛋白含量。

§檢測(cè)過程：取出所有試劑平衡到室溫→分別移取50µl標(biāo)準(zhǔn)液，對(duì)照物和樣品至待測(cè)孔→移取100µl anti- Vero Cell:HRP（#F501）至每孔→密封滴定板，搖床室溫溫育2小時(shí)，180rpm→清空小孔，用紙吸干殘留液，350µl清洗緩沖液清洗4次→加100µl TMB 作用物（#F005）→室溫靜置30分鐘，不需搖床→加100µl反應(yīng)終止液（#F006）→分光光度計(jì)450/650nm讀數(shù)

§結(jié)果分析：標(biāo)準(zhǔn)液（0, 1, 3, 12, 40, 100ng/mL）可用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)液濃度相當(dāng)于免疫反應(yīng)HCP總濃度。根據(jù)測(cè)定的小孔中標(biāo)準(zhǔn)液吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。數(shù)據(jù)分析可以使用計(jì)算機(jī)選配曲線，例如點(diǎn)到點(diǎn)，三次樣本函數(shù)，或四參數(shù)邏輯曲線。不要使用線性回歸分析修改樣品吸光值，這樣會(huì)出現(xiàn)顯著誤差。也可以手工繪圖，Y軸標(biāo)注吸光值，X軸標(biāo)注濃度，然后用光滑曲線連接各點(diǎn)。然后根據(jù)樣品吸光值計(jì)算出樣品中HCP濃度。（操作時(shí)每一濃度標(biāo)準(zhǔn)液都要滴定到兩個(gè)小孔中，以便計(jì)算平均分光光度值，樣品也需計(jì)算平均吸光值）。 

Vero Cell HCP ELISA組成成份：
● Anti- Vero Cell:HRP（辣根過氧化物酶標(biāo)記）     1x12mL   F501（Product#）
● Anti- Vero Cell coated微量滴定板           12x8孔  F502
● Vero Cell HCP標(biāo)準(zhǔn)液（0, 1, 3, 12, 40, 100ng/mL）   1mL/瓶 F503
● Stop Solution終止液（0.5M硫磺酸）      1x12mL F006
● TMB （3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯氨）            1x12mL F005
● Wash Concentrate清洗物（20倍濃縮）        1x50mL   F004 

Vero Cell HCP ELISA kit英文簡述：
Expression of viral vaccines and other therapeutic proteins in Vero cells is a cost effective method for production of commercial quantities of a drug substance. The kit was developed using actual final product and in-process samples for four different products from four vaccine manufacturers. These products included whole virus vaccines as well as recombinant proteins. The broadly reactive, affinity purified, polyclonal antibodies demonstrate a very high degree of conserved HCP across all Vero cell lines tested. The robustness of this very sensitive and specific ELISA method should facilitate successful validation for almost any product expressed in Vero cells. This kit has an LOD of ~0.7ng/mL.

重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司