神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基自然篩選法

    神經(jīng)系統(tǒng)疾病的基因?qū)胫委熑缜八觯┗蜣D(zhuǎn)染干細(xì)胞形成的永生細(xì)胞系不僅可以成功地整合于植入部位，而且可以穩(wěn)定地表達(dá)轉(zhuǎn)染的外源性基因，這就為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的基因治療提供了一個性能*的載體。利用溫度敏感性水生神經(jīng)干細(xì)胞系建立的分泌NGF的細(xì)胞系，將其移入到被*切斷穹隆的鼠紋狀體及中隔后，移植細(xì)胞不但能良好地存活于腦組織中而且在體內(nèi)還能持續(xù)分泌 NGF，并使90%的膽堿能神經(jīng)元得到修復(fù)。

    神經(jīng)干細(xì)胞是一種終身具有自我更新能力及廣泛分化潛能的細(xì)胞，它處于分化的非終末狀態(tài)，可通過對稱或不對稱分裂生成新的干細(xì)胞和分化潛能逐漸變小的子細(xì)胞，zui終產(chǎn)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)的三種主要細(xì)胞，既神經(jīng)元細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞。神經(jīng)干細(xì)胞存在于胚胎神經(jīng)系統(tǒng)及成年腦的某些特定部位，其特征性的生物學(xué)標(biāo)志為神經(jīng)巢蛋白。胚胎神經(jīng)干細(xì)胞的分裂增殖分化是神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生的基礎(chǔ)，成年神經(jīng)系統(tǒng)中干細(xì)胞的功能還不十分明確，一般認(rèn)為它們（尤其是位于海馬區(qū)的干細(xì)胞）很可能與認(rèn)知功能密切相關(guān)，是神經(jīng)功能可塑性的基礎(chǔ)。具體的說就是在某些外界環(huán)境影響下，干細(xì)胞在局部生成的新神經(jīng)元可以參加記憶的形成和整合，即大腦控制行為，行為又可以反過來影響大腦的結(jié)構(gòu)。

    神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基自然篩選法是迄今應(yīng)用，也是zui簡單和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培養(yǎng)基使成熟的神經(jīng)細(xì)胞無法較長時間地成活，而分離篩選出能夠在該培養(yǎng)條件下存活并增殖的神經(jīng)干細(xì)胞群體。首先將含神經(jīng)干細(xì)胞的神經(jīng)組織通過機(jī)械或酶解分散等方法制備成單細(xì)胞，然后培養(yǎng)于含有特殊營養(yǎng)添加劑和促增殖因子的不含血清的培養(yǎng)液中。非神經(jīng)干細(xì)胞在這種培養(yǎng)系統(tǒng)中由于營養(yǎng)缺陷無法較長時間地存活，而神經(jīng)干細(xì)胞則適應(yīng)該培養(yǎng)體系并在促增殖因子作用下生長增殖。因此，經(jīng)過培養(yǎng)一段時間之后，就可獲得通過這種自然篩選而增殖形成的呈神經(jīng)球狀生長的神經(jīng)干細(xì)胞群體。這種利用特殊培養(yǎng)基自然篩選神經(jīng)干細(xì)胞方法的優(yōu)點(diǎn)是：簡便易行，不需要特殊的儀器設(shè)備等條件，分離效率高，神經(jīng)干細(xì)胞損傷小易于成活。

    神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)另外很重要的一點(diǎn)就是如何盡量讓其少分化或不分化，除了神經(jīng)干細(xì)胞本身的特性決定了一部分不對稱分裂的細(xì)胞必將發(fā)生自主分化外，培養(yǎng)條件對神經(jīng)干細(xì)胞的分化與否影響很大，比如在培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，將神經(jīng)干細(xì)胞球培養(yǎng)于塑料器皿，其黏附于器皿表面并發(fā)生分化的可能要比培養(yǎng)于玻璃器皿的高很多。另外，某些底物如多聚賴氨酸或多聚尿氨酸、作為細(xì)胞外基質(zhì)的的層黏臉蛋白、膠原等都能在無特殊誘導(dǎo)劑存在的情況下，促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的貼壁而分化。神經(jīng)干細(xì)胞在體外分化的形態(tài)表現(xiàn)為由圓形變成帶有明顯突起、形態(tài)各異的神經(jīng)細(xì)胞，懸浮的神經(jīng)球出現(xiàn)貼壁呈圓盤狀，形態(tài)各異的細(xì)胞向周圍呈放射狀長出并遷移，甚至全部細(xì)胞均分化平鋪于器皿上生長。