Rubicon和Qiagen單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒的對比

一、Rubicon和Qiagen單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒的對比

參考：

1.The comparison of the performance of four whole genome amplification kits on ion proton platform in copy number variation detection. Xinyi Zhang et al.

2.Rubicon 資料，RB3050說明書.

3.Qiagen 資料，150343說明書.

二、產(chǎn)品介紹

Rubicon PicoPLEX WGA Kit單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒

單管，3步，PicoPlEX WGA試劑盒專門用于人單細(xì)胞和pg級DNA的擴(kuò)增，具有可重復(fù)性、低背景的特點(diǎn)。3小時內(nèi)完成細(xì)胞裂解、熱循環(huán)文庫制備和低背景擴(kuò)增，zui終能得到2-5µg擴(kuò)增DNA。

技術(shù)原理及特點(diǎn)

利用特殊隨機(jī)引物（Quasi-random primer）引發(fā)線性擴(kuò)增進(jìn)行全基因組擴(kuò)增。

相比于以往的PCR、MDA、MALBC為基礎(chǔ)的單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增技術(shù)，操作簡單快速。擴(kuò)增zui大優(yōu)勢：再現(xiàn)性良好。

REPLI-g Single Cell Kit 單細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒

REPLI-g Single Cell Kit 單細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒采用MDA技術(shù)，可均一的擴(kuò)增單個細(xì)胞（1至1000個細(xì)菌或腫瘤細(xì)胞）或純化的基因組DNA，能夠覆蓋基因組所有位點(diǎn)。產(chǎn)量穩(wěn)定，可達(dá)40 µg（產(chǎn)物平均長度大于>10 kb）。適用于二代測序等新技術(shù)應(yīng)用。可用于癌癥、干細(xì)胞或宏觀基因組學(xué)（metagenomics）研究。

技術(shù)原理及特點(diǎn)

REPLI-g Single Cell Kit 單細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒采用多重置換擴(kuò)增（MDA，Multiple Displacement Amplification）技術(shù)，對所有基因組位點(diǎn)進(jìn)行無偏差的擴(kuò)增。與基于PCR的全基因組擴(kuò)增技術(shù)相比，該技術(shù)具有更好的擴(kuò)增保真度，避免出現(xiàn)假陽性或假陰性信號。

多重置換擴(kuò)增(MDA)的恒溫基因組擴(kuò)增技術(shù)包含了隨機(jī)六聚體與變性DNA的結(jié)合過程，以及使用Phi 29聚合酶在恒定溫度下進(jìn)行的鏈置換合成過程。典型擴(kuò)增能夠生成40 µg以上的DNA產(chǎn)量，而不受起始模板量影響，這意味著在大多數(shù)應(yīng)用中無需進(jìn)行額外的DNA濃度檢測，既可直接進(jìn)行后續(xù)的遺傳學(xué)分析。

溫和的堿變性法

REPLI-g Kit采用溫和堿性孵育法，在DNA斷裂或去堿基化發(fā)生頻率非常低的情況下讓使其均勻地變性。這樣擴(kuò)增得到的DNA具有非常高的完整性，擴(kuò)增片段的長度達(dá)到zui大化，從而使基因組中的位點(diǎn)和序列都得以均勻呈遞。

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